grün fluoreszierendes Protein (GFP) ist eine Art biolumineszierendes Protein, das in Coelenteraten gefunden wird. GFP ist leicht zu erkennen, hohe Empfindlichkeit, stabile Fluoreszenz-Eigenschaften, starke Toleranz, leicht zu exprimieren, ohne Zytotoxizität, für die Lebendzell-Erkennung verwendet. Daher kann gfp als ein Reportergen verwendet werden, um Genexpression oder -regulation nachzuweisen, oder als eine Fusionsmarkierung, um die Lokalisierung, Migration, Konformationsänderung und intermolekulare Wechselwirkung von Proteinmolekülen zu detektieren oder bestimmte Organellen als Zielmarker zu markieren. der maximale Peak des GFP-Absorptionsspektrums beträgt 395 nm (UV) und mit einem 470 nm-Deputatabsorptionspeak (blauer Strahl). der maximale Peak des Emissionsspektrums ist 509 nm (grüner Strahl) und mit einem 540 nm Seitenpeak (Shouder). 450nm-490nm ist nur der stellvertretende Absorptionspeak von gfp, aber da das Anregungslicht den Zellen weniger Schaden zufügt, wird die Bande gewöhnlich häufiger verwendet (hauptsächlich 488nm). Darüber hinaus ähneln die Spektrumeigenschaften von gfp Fluoresceinisothiocyanat (fitc), beide von zwei haben in der Regel eine Reihe von Filtern. GFP-Fluoreszenz ist extrem stabil. unter dem Anregungslicht ist die Fähigkeit der Photobleichung durch GFP stärker als Fluorescein. insbesondere ist es bei der blauen Strahlenwelle von 450 nm-490 nm stabiler. in ähnlicher Weise ist die Empfindlichkeit der Fluoreszenz von GFP-Fusionsprotein höher als der fluoreszierende Antikörper der Fluorochrom-Markierung, ist starke Anti-Licht-Bleichfähigkeit, die für quantitative Bestimmung und Analyse besser geeignet ist. die Erzeugung von GFP-Fluoreszenz benötigt kein exogenes Reaktionssubstrat. Daher ist Gfp ein weit verbreitetes lebendes Reporterprotein, dessen Wirkung von keinem anderen Enzym-Reporterprotein erreicht wird. Gfp ist jedoch kein Enzym. das Fluoreszenzsignal hat keinen enzymatischen Verstärkungseffekt. Daher kann die Empfindlichkeit von GFP niedriger sein als bei anderen Enzym-Reporterproteinen, wie Glühwürmchen-Luciferase.

die Arten der Beobachtung von GFP:

1. tragbare Gfp-Anregungslichtquelle

Die Verwendung der tragbaren GfP-Anregungslichtquelle ist die bequemste und schnellste Beobachtungsmethode (Fluoreszenzbeobachtungsspiegel genannt). Da Gfp einen höheren Absorptionspeak bei 470 nm aufweist, kann die Verwendung von 470 nm Anregungslichtquelle gfp stimulieren, um eine hellgrüne Fluoreszenz zu emittieren. Wir müssen professionelles Beobachtungsglas tragen, um das klare Fluoreszenzsignal zu beobachten, wenn wir beobachten GFP-Fluoreszenz . Der Grund ist Anregungslicht ist intensives blaues Licht.

2.uv Lichtquelle

mit UV - Lichtquelle (genannt UV-Lampe , Schwarzlicht Lampe) Beobachtung ist auch sehr praktisch. aber wenn Sie die Pflanze beobachten, fluoresziert Blattgrün von Pflanzenlaub auch unter UV-Licht. es wird stören GFP-Fluoreszenz . Darüber hinaus können die Proben auch die GFP-Proben unter UV-Licht beschädigen.

3. Fluoreszenzmikroskop

Fluoreszenzmikroskop basiert auf UV als Lichtquelle, dient zur Bestrahlung des erkannten Objekts, lässt es fluoreszieren, beobachtet dann die Form und Lage des Objekts unter einem Mikroskop. Fluoreszenzmikroskop wird verwendet, um die Absorption von intrazellulären Substanzen, Transport, die Verteilung und Lokalisierung von chemischen Substanzen zu erforschen. Einige Substanzen in der Zelle, wie Blattgrün, können nach Bestrahlung mit ultraviolettem Licht fluoreszieren. andere Substanzen, fluoreszieren nicht in sich selbst, aber wenn man sie mit einem Fluoreszenzfarbstoff oder einem fluoreszierenden Antikörper färbt, kann sie auch durch ultraviolettes Licht fluoreszieren. Das Fluoreszenzmikroskop ist eines der Werkzeuge für die qualitative und quantitative Erforschung solcher Substanzen. Gegenwärtig verwendet das populäre Verfahren eine Fluoreszenzmikroskopbeobachtung. Fluoreszenzmikroskop ist im Labor sehr beliebt. aber der einzige Mangel ist, dass die Scheiben von Blatt oder Tier für die Beobachtung gesammelt werden müssen, die die kultivierten Exemplare zerstören wird und Viviperception nicht beobachten kann.

umfassende Analyse, es ist die schnellste und bequeme Methode, gfp zu beobachten, durch die Annahme portable gfp Anregungslichtquelle (genannt transgenic bios-cope).